Маслиҳатҳои асосӣ барои кристазони фарҳангҳои ҳуҷайра

Маслиҳатҳои асосӣ барои кристазони фарҳангҳои ҳуҷайра

Ҳуҷайраҳо ҳангоми фаъолиятҳои муқаррарии рушд мубодилаи мубодилаи худро идома медиҳанд, ки иштироки проблемаҳои гуногунро талаб мекунад. Вақте ки ҳарорат аз поён -70 ° C кашида мешавад, проблема кор карданро бас мекунад. Аз ин рӯ, дар муҳити зист бо ҳарорати хеле паст, ҳуҷайраҳо фаъолиятҳои мубодилаи худро қатъ мекунанд ва як ҳолати ноформро, ки ба нигаҳдории дарозмуддат имкон медиҳад, ворид кунанд.

1. Маводҳои таҷрибавӣ

Маводи асосӣ:

Воситаи асосӣ

Хуноба (FbSal Fbs / NBS)

Ultrapturew

Сулфоксиди Димеил (DMSO)

PBS StileAck Prosfer Stopfate Buffer Buffer

Таппонча

Таппончаи пиптаи барқӣ

Омодасозии таҷрибаҳо

а) Омодасозии ҳалли яхкунӣ:

Ҳуҷайраҳои умумӣ: 55% Basal Mobile + 40% Bovine Herum

Ҳуҷайраҳои ҳаётан муҳим: 90% Bovine Herum

Ҳалли кристиаеро таҳияшуда ба 15 мл Centrifuge 5 ML Centrifuge [лона] ва дар 4 ° C барои истифодаи баъдӣ нигоҳ доред.

(б) омода кардани ҳуҷайраҳо барои яхкардашуда:

Пеш аз ях кардани чашмакҳо Чашмакҳоро бо ҳолати хуби рушд интихоб кунед ва дар марҳилаи афзоиши вокуниш ба ҷои 12-24 соат пеш аз яхкунӣ, нигоҳ доштани ҳолати ҳуҷайра.

2. Тартиби таҷрибавӣ

1. Таъсиси зичии ҳуҷайраҳо барои яхкардашуда, ки тақрибан 80% ~ 90% -ро ташкил медиҳад. Як таппончаи қубурро ба муҳити кӯҳна истифода баред, то ҳуҷайраҳои хушкакориро илова кунед, то ҳуҷайраҳои 1-2 маротиба дар муҳити фарҳангӣ шуста шаванд ва дар муҳити фарҳангӣ хориҷ кунед.

2. Миқдори дурусти Трипсинро илова кунед ё афшураи ҳозима барои ба Трипсин иҷозат диҳед, ки ба ҳуҷайраҳо ворид шаванд ва онҳоро дар инкубатор барои ҳозима ҷойгир кунед. Ҳолати чашмакҳои зери микроскопро мушоҳида кунед: Cytophlasm ретовар аст ва ҳуҷайраҳо акнун дигар ба варақ мезананд. Дар ин лаҳза, ҳалли қатъро боздоштани раванди ҳозима илова кунед.

3. Ҳуҷайраҳоро бо нӯги бо нӯги ба таври таваққуфи ҳуҷайра ва сентифучарои 1000 RPM барои 3-5 дақиқа таваққуф кунед.

Бахшишро партоед, миқдори дурусти ҳалли яхкуниро илова кунед ва хушхӯю пипетка барои пайваст кардани чашмакҳо. Зичии истиқоматро бо craprosizesresressizent танзим кунед, то зичии ниҳоӣ 5 × 106 / ML ~ 1 × 107 / мл.

4. Барои ҷудо кардани иқтидори пешбинишуда таппончаи қубурро истифода баред ва мошини худкор ба ҳадди ақал ва мӯҳрро истифода баред.

5. Барномаи меъёрии Crorosprest сатҳи хунуккунии -1 ° C то -2 ° C / min, ки яхкардашуда бояд тадриҷан мувофиқи қадамҳои зерин ях карда шавад: ҳарорати хонагӣ → 4 ° C (20мин) → 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (як шаб) → Нигоҳдории дарозмуддат дар нитрогенҳои моеъ.

Он инчунин бевосита дар яхдон дар як яхбаъ дар як шаб нигоҳ дошта мешавад ва баъд ба нитроген барои нигаҳдорӣ интиқол дода мешавад.

Yongyueue аз як корхонаи олӣ, ки дар R & D, истеҳсол ва фурӯши маблағҳои биомадрӣ тахассус аст. Маслиҳатҳои Pipette, Pipettes, табақи PCR, маҳсулоти фарҳангӣ ва дигар корхонаҳои биологии хурд. Yongyue тиббӣ сазовори боварӣ ва интихоби шумо аст! Хуш омадед ба машварат!